Beispiele REM Beschichtungsflüssigkeit mit biologischen Proben

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Glomeruläre Nierenoberfläche

Präparartionsbedingungen (4° C): Nach Fixation mit 2% Glutaraldehyd Perfusion, geschnitten (Dicke ca. 0,5 mm) und 2. Fixierung ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung 2 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Tanninsäure wässrige Lösung, 3 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung 2 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 3x ⇒ 2% BEL-1 (70% Ethanol) 1,5 Stunden  eingetaucht ⇒ Gebläse, Kaltluft-getrocknet,  Untersuchungsbedingungen: SE-Detektor, Beschleunigungsspannung 3KV, WD20, Emissionsstrom (0,8 bis 4,7 μA)

Glomeruläre Rattenniere

Präparartionsbedingungen (4° C): Nach Fixation mit 2% Glutaraldehyd Perfusion, geschnitten (Dicke ca. 0,5 mm) und 2. Fixierung ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Tanninsäure wässrige Lösung, 3 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung 2 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 3x ⇒ 2% BEL-1 (70% Ethanol) 1,5 Stunden eingetaucht ⇒ Gebläse, Kaltluft-getrocknet, Untersuchungsbedingungen: SE-Detektor, Beschleunigungsspannung 3KV, WD20, Emissionsstrom (0,8 bis 4,7 μA)

Rattenniere proximal tubule  (Bürstenrand)
Proximal-tubule-conductive-staining2
Präparartionsbedingungen (4° C): Nach Fixation mit 2% Glutaraldehyd Perfusion, geschnitten (Dicke ca.. 0,5 mm) und 2. Fixierung ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung 2 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Tanninsäure wässrige Lösung 3 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung 2 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 3x ⇒ 2% BEL-1 (70% Ethanol) 1,5 Stunden eingetaucht ⇒ Gebläse, Kaltluft-getrocknet,  Untersuchungsbedingungen: SE-Detektor, Beschleunigungsspannung 3KV, WD20, Emissionsstrom (0,8 bis 4,7 μA)

Rattenniere Glomeruläres Schnittbild (innere Oberfläche des Blutgefäßes)
Glomerular-cleavage-conductive-staining2
Präparartionsbedingungen (4° C): Nach Fixation mit 2% Glutaraldehyd Perfusion, geschnitten (Dicke ca. 0,5 mm) and 2. Fixierung ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung 2 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Tanninsäure wässrige Lösung 3 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung 2 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 3x ⇒ 2% BEL-1 (70% Ethanol) 1,5 Stunden eingetaucht ⇒ Gebläse, Kaltluft-getrocknet,  Untersuchungsbedingungen: SE-Detektor, Beschleunigungsspannung 3KV, WD20, Emissionsstrom (0,8 bis 4,7 μA)

Rattenniere Proximaler Tubulus (Bürstenrand)
Proximal-tubule-conductive-staining3
Präparartionsbedingungen (4° C): Nach Fixation mit 2% Glutaraldehyd Perfusion, geschnitten (Dicke ca. 0,5 mm) und 2. Fixierung ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung 2 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Tanninsäure wässrige Lösung 3 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung 2 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 3x ⇒ 2% BEL-1 (70% Ethanol) 1.5 Stunden eingetaucht ⇒ Gebläse, Kaltluft-getrocknet
Untersuchungsbedingungen: SE-Detektor, Beschleunigungsspannung 3KV, WD20, Emissionsstrom (0,8 bis 4,7 μA)

Rattenleber Gallenkanal
Capillary-bile-duct-conductive-staining2
Präparartionsbedingungen (4° C): Nach Fixation mit 2% Glutaraldehyd Perfusion, geschnitten (Dicke ca. 0,5 mm) und 2. Fixierung ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung 2 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Tanninsäure wässrige Lösung 3 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung 2 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 3x ⇒ 2% BEL-1 (70% Ethanol) 1.5 Stunden eingetaucht ⇒ Gebläse, Kaltluft-getrocknet
 Untersuchungsbedingungen: SE-Detektor, Beschleunigungsspannung 3KV, WD20, Emissionsstrom (0,8 bis 4,7 μA)

Rattenleber Gefäßendothelzellen
Vascular-endothelial-cells-conductive-staining2
Präparartionsbedingungen (4° C): Nach Fixation mit 2% Glutaraldehyd Perfusion, geschnitten (Dicke ca. 0,5 mm) und 2. Fixierung ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung 2 Stunden ⇒ DW Minuten, 6x ⇒ 1% Tanninsäure wässrige Lösung 3 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung 2 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 3x ⇒ 2% BEL-1 (70% Ethanol) 1,5 Stunden eingetaucht ⇒ Gebläse, Kaltluft-getrocknet Untersuchungsbedingungen: SE-Detektor, Beschleunigungsspannung 3KV, WD20, Emissionsstrom (0,8 bis 4,7 μA)

Ratte Microvilli
Microvilli-conductive-staining
Präparartionsbedingungen (4° C): Nach Fixation mit 2% Glutaraldehyd, geschnitten (Dicke ca. 0,5 mm) und 2. Fixierung ⇒ Fixierung mit 1% Osmiumtetroxid 2 Fixierung ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Tanninsäure wässrige Lösung 3 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 6x ⇒ 1% Osmiumtetroxid Fixierung 2 Stunden ⇒ DW 10 Minuten, 3x ⇒ 2% BEL-1 (70% Ethanol) 1,5 Stunden eingetaucht ⇒ Gebläse, Kaltluft-getrocknet Untersuchungsbedingungen: SE-Detektor, Beschleunigungsspannung 3KV, WD20, Emissionsstrom (0,8 bis 4,7 μA)

Rattenniere Glomeruläres Schnittbild (innere Oberfläche des Blutgefäßes)
Glomerular-cleavage-conductive-staining
Doppelfixierung ⇒ 5% BEL-1 (70% Ethanol) eingetaucht für 2 Stunden ⇒ Trocknung (Gebläse, Kaltluft-getrocknet)

Proximaler Tubulus (Bürstenrand)
Proximal-tubule-conductive-staining
Doppelfixierung ⇒ 5% BEL-1 (70% Ethanol) eingetaucht für 2 Stunden ⇒ Trocknung (Gebläse, Kaltluft-getrocknet)

 

 

Rattenniere Renale Glomeruli
Kidney-glomerulus-conductive-staining
Doppelfixierung ⇒ 5% BEL-1 (70% Ethanol) eingetaucht für 2 Stunden ⇒ Trocknung (Gebläse, Kaltluft-getrocknet)

Rattenniere proximal tubule (brush border)
ranal-glomerular-surface-conductive-staining2
Doppelfixierung ⇒ 5% BEL-1 (70% Ethanol) eingetaucht für 2 Stunden ⇒ Trocknung (Gebläse, Kaltluft-getrocknet)

RattenniereGlomeruläre Nierenoberfläche
ranal-glomerular-surface-conductive-staining
Doppelfixierung ⇒ 5% BEL-1 (70% Ethanol) eingetaucht für 2 Stunden ⇒ Trocknung (Gebläse, Kaltluft-getrocknet)

Dünndarm bei Ratten Weicher überstand
Soft-projection-conductive-staining
Doppelfixierung ⇒ 5% BEL-1 (70% Ethanol) eingetaucht für 2 Stunden ⇒ Trocknung (Gebläse, Kaltluft-getrocknet)

Rattenleber Gallenkanal
Capillary-bile-duct-conductive-staining
Doppelfixierung ⇒ 5% BEL-1 (70% Ethanol) eingetaucht für 2 Stunden ⇒ Trocknung (Gebläse, Kaltluft-getrocknet)

Rattenleber Gefäßendothelzellen
Vascular-endothelial-cells-conductive-staining
Doppelfixierung ⇒ 5% BEL-1 (70% Ethanol) eingetaucht für 2 Stunden ⇒ Trocknung (Gebläse, Kaltluft-getrocknet)

Neutrophile
Neutrophil-conductive-staining
1% GA Fixation (Trägerglas mit PLL Beschichtung) 30 Minuten Adhesion (nass) ⇒ DW ⇒ 10% BEL-1 (Verdünnte Lösung: 100% Ethanol) 10 Minuten eingetaucht ⇒ Trocknung (Gebläse → Kaltluft-getrocknet ca. 15 Minuten) Untersuchungsbedingungen: SE-Detektor, oberer Emissionsstrom 5.5μA

Kieselalgen
Diatoms-conductive-staining3
2% GA Fixierung ⇒ DW ⇒ 10% BEL-1 (70% Ethanol) 10 Minuten eingetaucht ⇒ Trocknung (Gebläse, Kaltluft-getrocknet) Untersuchungsbedingungen: Beschleunigungsspannung 3KV, Emissionsstrom: 5.5μA SE-Detektor: Mix

Kieselalgen
Diatoms-conductive-staining
1% GA ⇒ DW ⇒ 10% BEL-1 (70% Ethanol) 10 Minuten ⇒ Trocknung (Kaltluft-getrocknet)

Kieselalgen
Diatoms-conductive-staining2
1% GA ⇒ DW ⇒ 10% BEL-1 (70% Ethanol) 10 Minuten ⇒ Trocknung (Kaltluft-getrocknet)

Megalopa-Larve
Megalopa larva-conductive-staining
1% GA ⇒ DW ⇒ 10% BEL-1 (70% Ethanol) 10 Minuten ⇒ Trocknung (Kaltluft-getrocknet)

Megalopa-Larve
Megalopa larva-conductive-staining2
1% GA ⇒ DW ⇒ 10% BEL-1 (70% Ethanol) 10 Minuten ⇒ Trocknung (Kaltluft-getrocknet)

Rote Blutkörperchen
Red-blood-cells-conductive-staining
10% (Verdünnte Lösung: 100% Ethanol) 10 Minuten eingetaucht, Beschleunigungsspannung 3kV Emissionsstrom 5,5μA, SE-Detektor

Weiße Blutkörperchen
White-blood-cells-conductive-staining
10% (Verdünnte Lösung: 100% Ethanol) 10 Minuten eingetaucht, Beschleunigungsspannung 3kV Emissionsstrom 5,5μA, SE-Detektor

Auf REM Probenteller
SEM-slide-glass-used-conductive-staining
1% GA Fixation (Auf REM Probenteller) 30 Minuten Adhesion (nass)  ⇒ DW ⇒ 10% BEL-1 (Verdünnte Lösung: 70% Ethanol) 10 Minuten eingetaucht ⇒ Trocknung (Gebläse → Kaltluft-getrocknet ca. 15 Minuten) Untersuchungsbedingungen: SE-Detektor oberer Emissionsstrom 5,5μA

Auf REM Probenteller
SEM-slide-glass-used-conductive-staining2
1% GA Fixation (Auf REM Probenteller) 30 Minuten Adhesion (nass) ⇒ DW ⇒ 10% BEL-1 (Verdünnte Lösung: 70% Ethanol) 10 Minuten eingetaucht ⇒ Trocknung (Gebläse → Kaltluft-getrocknet ca. 15 Minuten) Untersuchungsbedingungen: SE-Detektor oberer Emissionsstrom 5,5μA

Auf REM Probenteller
SEM-slide-glass-used-conductive-staining3
1% GA Fixation (Auf REM Probenteller) 30 Minuten Adhesion (nass)  ⇒ DW ⇒ 10% BEL-1 (Verdünnte Lösung: 70% Ethanol) 10 Minuten eingetaucht ⇒ Trocknung (Gebläse → Kaltluft-getrocknet ca. 15 Minuten) Untersuchungsbedingungen: SE-Detektor, oberer Emissionsstrom 5,5 μA

Auf REM Probenteller
SEM-slide-glass-used-conductive-staining4<
1% GA Fixation (Auf REM Probenteller) 30 Minuten Adhesion (nass)  ⇒ DW ⇒ 10% BEL-1 (Verdünnte Lösung: 70% Ethanol) 10 Minuten eingetaucht ⇒ Trocknung (Gebläse → Kaltluft-getrocknet ca. 15 Minuten) Untersuchungsbedingungen: SE-Detektor, oberer Emissionsstrom 5,5 μA

Courtesy of St. Marianna University School of Medicine, Electron Microscope Research Facility Chisako Sasaki

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